產(chǎn)品分類

細(xì)胞分類

您的位置：首頁(yè) > 技術(shù)文章 > 細(xì)胞又雙叒叕污染了，莫慌，幫您拯救珍貴細(xì)胞！

技術(shù)文章

細(xì)胞又雙叒叕污染了，莫慌，幫您拯救珍貴細(xì)胞！

更新更新時(shí)間：2021-04-29 瀏覽次數(shù)：4086

在細(xì)胞培養(yǎng)過(guò)程中，廣大科研工作者一直飽受微生物污染的困擾，幾乎所有科研單位的細(xì)胞房都曾經(jīng)遭受過(guò)細(xì)菌、真菌、支原體、黑膠蟲的污染，尤其是一些珍貴的細(xì)胞種子，一旦招惹上這幾個(gè)家伙，甚至面臨“絕種”的危險(xiǎn)。針對(duì)細(xì)胞培養(yǎng)當(dāng)中面臨的普遍的問(wèn)題，作為科研工作者的我們必須清楚認(rèn)識(shí)這些微生物，并通過(guò)技術(shù)手段判斷細(xì)胞遭受了哪種污染，準(zhǔn)確的對(duì)癥下藥，才能為我們的細(xì)胞保駕護(hù)航。

1 細(xì)菌污染

1.1 細(xì)菌污染的鑒別

細(xì)菌污染是細(xì)胞培養(yǎng)當(dāng)中最常出現(xiàn)的污染類型，槍頭不小心碰到瓶壁、手不小心從培養(yǎng)瓶口處穿過(guò)、培養(yǎng)基倒入培養(yǎng)瓶等等，不經(jīng)意的一個(gè)小動(dòng)作，都可能會(huì)造成細(xì)菌污染，以致于實(shí)驗(yàn)前功盡棄。細(xì)菌污染在沒(méi)有爆發(fā)或培養(yǎng)體系中含有雙抗時(shí)，細(xì)菌污染較容易被科研工作者忽視，黑點(diǎn)在顯微鏡下一穿而過(guò)，小黑點(diǎn)因?yàn)閿?shù)量少且移動(dòng)迅速而不易發(fā)現(xiàn)。隨著細(xì)菌在培養(yǎng)體系中的增多或者體系中撤掉雙抗以后，細(xì)菌可以從鏡下明顯識(shí)別，會(huì)呈現(xiàn)黑色條狀、棒狀、球狀，培養(yǎng)基的外觀也會(huì)發(fā)生明顯的變化，培養(yǎng)基變渾濁，有細(xì)沙狀沉淀，有時(shí)會(huì)伴有臭味。

1.2 細(xì)菌污染的解決方式

一般的細(xì)胞培養(yǎng)體系中，普遍采用雙抗或者三抗進(jìn)行細(xì)菌的預(yù)防，但這兩者存在一定的局限性，比如只能預(yù)防，而不能拯救已經(jīng)細(xì)菌污染的細(xì)胞。另外，很多科研工作者從事原代的細(xì)胞分離和培養(yǎng)工作，在從動(dòng)物身上取材并分離培養(yǎng)的過(guò)程中，極易造成細(xì)菌污染，如果只是加入雙抗或三抗進(jìn)行沖洗組織，細(xì)菌污染無(wú)法避免，造成了珍貴動(dòng)物組織的浪費(fèi)。

好物推薦-鏡像綺點(diǎn)（iCell）細(xì)胞污染高效清除劑

iCell 細(xì)胞污染高效清除劑，不僅兼具雙抗或三抗預(yù)防細(xì)菌的功效，還可以清除支原體污染，有效消除真菌和細(xì)菌的污染，只需 1-3 天就可顯著抑制支原體、真菌、細(xì)菌的增殖，本產(chǎn)品經(jīng)過(guò)了上百種細(xì)胞的測(cè)試和長(zhǎng)期的實(shí)驗(yàn)驗(yàn)證，兼具高效和廣譜清除細(xì)胞污染物的能力，對(duì)細(xì)胞生長(zhǎng)幾乎無(wú)影響，大程度上挽救您的細(xì)胞。
2.真菌污染

2.1 真菌污染的鑒別

實(shí)驗(yàn)室污染的真菌一般為三類：念珠菌、酵母菌、霉菌，細(xì)胞污染真菌通常不易察覺，只有霉菌會(huì)逐漸出現(xiàn)細(xì)絲團(tuán)狀漂浮物，較容易從外觀發(fā)覺污染，其他真菌污染不像細(xì)菌污染培養(yǎng)基會(huì)渾濁，污染后培養(yǎng)液清澈透亮，與未污染的細(xì)胞從外觀上看無(wú)明顯變化。
在顯微鏡下比較容易判斷污染類型，念珠菌呈卵圓狀，在細(xì)胞周邊生長(zhǎng)，酵母菌出芽生殖時(shí)有明顯的一大一小連體結(jié)構(gòu)，霉菌可觀察到菌體，菌絲呈絲狀、管狀、樹枝狀。

2.2 真菌污染的解決方式

真菌污染由于不容易通過(guò)培養(yǎng)基的變化來(lái)判斷，一般發(fā)現(xiàn)時(shí)就是已經(jīng)爆發(fā)了，鏡下會(huì)出現(xiàn)明顯團(tuán)狀或黑色絲狀污染物，細(xì)胞狀態(tài)明顯變差，很難救活。傳統(tǒng)的預(yù)防真菌污染的方式為培養(yǎng)體系中加入三抗，但是一旦發(fā)生真菌污染，三抗對(duì)于明顯的真菌污染就顯得心有余而力不足，此時(shí)建議如果是還留存種子的細(xì)胞就立刻扔掉，*消毒滅菌細(xì)胞房和 CO2 培養(yǎng)箱，扔掉可能被污染的培養(yǎng)基，對(duì)用過(guò)的實(shí)驗(yàn)器材進(jìn)行滅菌。

好物推薦-鏡像綺點(diǎn)（iCell）真菌清除劑

真菌清除劑用于防止細(xì)胞培養(yǎng)過(guò)程中的真菌（包括酵母）污染，還可用于消除細(xì)胞培養(yǎng)物中的真菌（含酵母）污染。療效遠(yuǎn)超真菌抗生素兩性霉素 B，對(duì)細(xì)胞培養(yǎng)過(guò)程中的真菌污染，如白色念珠菌、曲霉、酵母有很好的療效。

真菌清除試劑經(jīng)過(guò)了上百種細(xì)胞的測(cè)試和長(zhǎng)期的實(shí)驗(yàn)驗(yàn)證，只需 1-3 天就可以抑制真菌增長(zhǎng)。對(duì)細(xì)胞基本無(wú)害，具有高效、特異性殺滅的特點(diǎn)，大程度上挽救珍貴的細(xì)胞，減少真菌污染帶來(lái)的損失。

3 黑膠蟲污染

3.1 黑膠蟲污染的鑒別

“黑膠蟲”是一種常見的細(xì)胞污染物，與細(xì)胞共生，隨細(xì)胞傳代而傳代。“黑膠蟲”與細(xì)胞競(jìng)爭(zhēng)性生長(zhǎng)，對(duì)細(xì)胞生長(zhǎng)不利，嚴(yán)重時(shí)導(dǎo)致細(xì)胞死亡。目前很多細(xì)胞存在被“黑膠蟲”污染的現(xiàn)象，對(duì)細(xì)胞培養(yǎng)及其后續(xù)實(shí)驗(yàn)造成了極大地影響。
“黑膠蟲”污染的細(xì)胞常見的特性有以下幾點(diǎn)：
（1）培養(yǎng)基不渾濁，但在顯微鏡下觀察細(xì)胞時(shí)，細(xì)胞周圍和培養(yǎng)液中有很多“小黑點(diǎn)”，且隨著培養(yǎng)時(shí)間的延長(zhǎng)“小黑點(diǎn)”逐漸增多，更換培養(yǎng)液或洗滌細(xì)胞不能將其去除；
（2）“黑膠蟲”污染的細(xì)胞，營(yíng)養(yǎng)消耗快，需要頻繁更換培養(yǎng)液；
（3）“黑膠蟲”污染的細(xì)胞生長(zhǎng)緩慢，細(xì)胞狀態(tài)差，空泡化嚴(yán)重，甚至還可能導(dǎo)致細(xì)胞形態(tài)的改變。

3.2 黑膠蟲污染的解決方式
對(duì)于黑膠蟲污染的細(xì)胞，最為快速有效的處理方式就是采用黑膠蟲清除劑對(duì)黑膠蟲進(jìn)行清除，同時(shí)確保培養(yǎng)體系中的血清必須為無(wú)黑膠蟲和原蟲污染的優(yōu)質(zhì)血清。

好物推薦-鏡像綺點(diǎn)（iCell）黑膠蟲清除劑

黑膠蟲清除試劑用于清除細(xì)胞培養(yǎng)過(guò)程中產(chǎn)生的“黑點(diǎn)”，只需 1-3 天就可以顯著抑制“黑點(diǎn)”生長(zhǎng)，一周左右即可清除“黑點(diǎn)”。

本產(chǎn)品經(jīng)過(guò)了上百種細(xì)胞的測(cè)試和長(zhǎng)期的實(shí)驗(yàn)驗(yàn)證，對(duì)細(xì)胞生長(zhǎng)無(wú)明顯影響，具有高效、特異性殺滅的特點(diǎn)，可顯著清除黑膠蟲污染，大程度上挽救珍貴的細(xì)胞。

黑膠蟲清除案例

4 支原體污染

4.1 支原體污染的鑒別

支原體直徑約為 0.1-0.3 μm，具有變形能力，可透過(guò)常見過(guò)濾膜（0.22-0.45 μm），因此常規(guī)的無(wú)菌過(guò)濾方法不能將其去除，常用的抗生素也對(duì)支原體無(wú)效。
支原體污染是細(xì)胞培養(yǎng)領(lǐng)域的一個(gè)世界性問(wèn)題，世界各國(guó)細(xì)胞系支原體污染的平均比例為 30-60%。支原體可通過(guò)細(xì)胞之間交叉污染，操作人員的口腔、皮膚造成污染，或者血清等添加物而帶入污染。

支原體在光學(xué)顯微鏡下不可見，一般不會(huì)引起培養(yǎng)物混濁，因此細(xì)胞被支原體污染一般難以察覺。
支原體會(huì)消耗必須氨基酸，影響細(xì)胞生長(zhǎng)速率，促進(jìn)代謝物積累，改變細(xì)胞形態(tài)，影響 DNA、RNA 以及蛋白質(zhì)的合成，抑制細(xì)胞因子表達(dá)，改變被污染細(xì)胞的基因表達(dá)譜，誘導(dǎo)染色體畸變。

好物推薦-鏡像綺點(diǎn)（iCell）支原體 PCR 檢測(cè)試劑盒
支原體 PCR 檢測(cè)試劑盒是優(yōu)選直擴(kuò)式 PCR 酶擴(kuò)增支原體基因組中保守 16SrDNA 而設(shè)計(jì)的，不會(huì)擴(kuò)增細(xì)菌等其他基因組，兼具特異性和高靈敏性的特點(diǎn)，且本試劑盒檢測(cè)范圍廣，可檢測(cè)：(1)M.Hyorhinis，(2)M.Fermentans，(3)M.Arginini，(4)M. hominis，(5)M. orale，(6)M. salivarium，(7)M.pirum，(8)Acholeplasma Laidlawii，(9)M. agalactiae， (10)M.bovis，(11)M. buccale，(12)M. arthritidis，(13)M. pulmonis 等幾乎所有常見的污染細(xì)胞的支原體(注：M.為 Mycoplasma 的縮寫)。
以上 13 種支原體約占細(xì)胞支原體污染的 99% 以上。絕大多數(shù)支原體污染集中于前 8 種。因此非常適合于與細(xì)胞生物學(xué)相關(guān)的科研實(shí)驗(yàn)室及企業(yè)的日常支原體檢測(cè)。

●高廣譜性，可檢測(cè)所有可能含有支原體的樣品

●高靈敏度，可檢測(cè)低至 10 copies 的支原體

●高特異性，真核生物、細(xì)菌的基因組不會(huì)被檢測(cè)

●高保真性，本試劑盒含有陽(yáng)標(biāo)和陰標(biāo)，可有效避免 PCR 反應(yīng)假陰性和假陽(yáng)性

●操作簡(jiǎn)易，本試劑盒的預(yù)混體系包含 PCR 反應(yīng)所需試劑

●耗時(shí)短，本試劑盒能夠在 2 小時(shí)內(nèi)完成支原體檢測(cè)

4.2 支原體污染的解決方式

好物推薦-鏡像綺點(diǎn)（iCell）支原體預(yù)防劑

支原體預(yù)防試劑適合細(xì)胞支原體感染的預(yù)防，不僅可用于預(yù)防環(huán)境和體系可能造成的支原體交叉污染，還可應(yīng)用于防止支原體污染的復(fù)發(fā)。

本產(chǎn)品經(jīng)過(guò)了上百種細(xì)胞的測(cè)試和長(zhǎng)期的實(shí)驗(yàn)驗(yàn)證，只需 1-3 天就可以顯著抑制支原體生長(zhǎng)，對(duì)細(xì)胞生長(zhǎng)幾乎無(wú)影響，兼具高效與溫和清除細(xì)胞污染物的特點(diǎn)，大程度上挽救您的細(xì)胞。

好物推薦-鏡像綺點(diǎn)（iCell）支原體清除劑（三款）：
支原體高效清除劑、支原體清除劑、支原體清除劑 plus

支原體清除劑適合支原體污染嚴(yán)重的細(xì)胞，不僅可用于細(xì)胞株，還可應(yīng)用于“脆弱”和易變形的細(xì)胞，如各類原代細(xì)胞、干細(xì)胞、上皮樣細(xì)胞系，不僅可以顯著清除支原體污染，還具有消除細(xì)菌污染的能力。

支原體清除劑有三種，分別是支原體清除劑、支原體高效清除劑、支原體清除劑 plus。
支原體溫和清除劑：溫和、高效清除支原體，對(duì)細(xì)胞生長(zhǎng)幾乎無(wú)影響，覆蓋所有細(xì)胞類型。

支原體清除劑：適合支原體污染非常嚴(yán)重，產(chǎn)生較強(qiáng)耐藥性的細(xì)胞支原體清除。

支原體清除劑 plus：適用于支原體污染非常嚴(yán)重、有*耐藥性且污染多種支原體的情況，此情況較為少見。

本產(chǎn)品經(jīng)過(guò)了上百種細(xì)胞的測(cè)試和長(zhǎng)期的實(shí)驗(yàn)驗(yàn)證，只需 1-3 天就可以顯著抑制支原體生長(zhǎng)， 2 周左右即可清除支原體污染，兼具快速和高效清除細(xì)胞污染物的特點(diǎn)，大程度上挽救您的細(xì)胞。

好物推薦-鏡像綺點(diǎn)（iCell）支原體清除服務(wù)

① 根據(jù)客戶提供的細(xì)胞名稱、細(xì)胞代次、細(xì)胞類型制定細(xì)胞的支原體清除方案；

② 細(xì)胞 STR 鑒定；

③ 支原體 PCR 高敏法檢測(cè)支原體污染程度；

④ 細(xì)胞的支原體清除。一般污染單一支原體的清除時(shí)間為 2 周左右，感染多種支原體且非常嚴(yán)重的細(xì)胞，清除時(shí)間需要延長(zhǎng)，約 3-4 周左右；

⑤ 2 周后，再次進(jìn)行支原體檢測(cè)，如果細(xì)胞支原體清除干凈，將換為 iCell 預(yù)防支原體方案，繼續(xù)一周左右時(shí)間；如未清除干凈，適當(dāng)延長(zhǎng) 1-2 周清除頑固支原體，1-2 周后再次進(jìn)行復(fù)檢。

支原體清除案例

如上圖 1 所示，左側(cè)為支原體污染的 MCF-7（100X）細(xì)胞，右側(cè)為支原體清除后的 MCF-7 細(xì)胞，倒置顯微鏡下可明顯看出細(xì)胞間隙間黑點(diǎn)明顯減少，細(xì)胞邊緣清晰，狀態(tài)良好。

如上圖 2 所示，左側(cè)為支原體污染的 Hep G2 （200X）細(xì)胞，右側(cè)為支原體清除試劑處理的Hep G2 細(xì)胞。左側(cè)有支原體污染的細(xì)胞樣品可以觀察到細(xì)胞核周圍微粒狀或絲狀藍(lán)色熒光。
支原體污染嚴(yán)重的細(xì)胞可以觀察到大量微粒狀或絲狀藍(lán)色熒光。右側(cè)細(xì)胞支原體污染被清除干凈，僅觀察到細(xì)胞核的藍(lán)色熒光，證明支原體已被清除干凈。

好物推薦-鏡像綺點(diǎn)（iCell）實(shí)驗(yàn)室除菌衛(wèi)士

實(shí)驗(yàn)室衛(wèi)士為高效廣譜除菌劑，具有廣譜殺菌性，能有效阻止真菌（和孢子），細(xì)菌（和孢子），支原體和病毒（包括 HIV 和 Hepatitis B）的生長(zhǎng)和污染，去除效率能夠達(dá)到99.999 %，不含汞、甲醛、ben酚或酒精等刺激性物質(zhì)，無(wú)毒、無(wú)刺激性氣味、可生物降解、不染色衣服、可消除氣味。
對(duì)一般的工作臺(tái)和器材表面（包括不銹鋼材質(zhì)）沒(méi)有任何損傷，不損傷漆面光澤，不會(huì)使塑料老化，培養(yǎng)箱、超凈工作臺(tái)、生物安全柜、細(xì)胞培養(yǎng)和分子生物學(xué)實(shí)驗(yàn)室均可使用。

實(shí)驗(yàn)室衛(wèi)士的殺菌范圍依賴噴灑時(shí)間，15 秒內(nèi)可滅活：大腸桿菌、金黃色葡萄球菌、變形桿菌、沙門氏菌、假絲酵母菌；
30 秒內(nèi)可滅活：青霉菌、曲霉菌；
60 秒內(nèi)可滅活：綠膿桿菌；
30 分鐘內(nèi)可滅活：支原體、衣原體、金黃色葡萄球菌、埃希氏菌、假單胞菌、克雷伯氏菌、假絲酵母菌；30 分鐘可破壞：曲霉菌（包括黑曲霉）、艾滋病毒，乙型肝炎病毒。

本品為即用型噴霧，直接使用即可。

好物推薦-鏡像綺點(diǎn)（iCell）水浴鍋除菌劑

水浴鍋除菌劑是針對(duì)水浴環(huán)境的高效抗菌劑，能夠有效殺滅細(xì)菌、真菌、支原體，保持細(xì)胞水浴的無(wú)菌狀態(tài)。
水浴鍋、水浴搖床是細(xì)胞污染源之一，使用本產(chǎn)品能夠有效清除和抑制革蘭氏陽(yáng)性菌、革蘭氏陰性菌、支原體等易在水中滋生的微生物生長(zhǎng)，有效防止細(xì)胞污染。

好物推薦-鏡像綺點(diǎn)（iCell）細(xì)胞培養(yǎng)箱水盤除菌劑

CO2 培養(yǎng)箱在細(xì)胞培養(yǎng)中普遍使用，由于半敞開式的培養(yǎng)瓶中培養(yǎng)基的滲漏，高濕度及適宜溫度為培養(yǎng)箱中微生物滋生提供條件，所以要提前預(yù)防，避免污染源出現(xiàn)。
細(xì)胞培養(yǎng)箱水盤除菌劑是 CO2 培養(yǎng)箱水盤的消毒劑，可有效殺滅支原體、細(xì)菌、酵母菌和真菌，建議每 2 周或至少 1 個(gè)月，進(jìn)行一次系統(tǒng)地清潔和消毒培養(yǎng)箱，可去除培養(yǎng)過(guò)程中的潛在污染源。

細(xì)胞污染不易察覺，卻是關(guān)乎我們實(shí)驗(yàn)成敗的大事，越是需要我們?nèi)粘５恼J(rèn)真對(duì)待，相信以上對(duì)于細(xì)胞房常見污染物的鑒別和解決方案的制定，能幫助我們科研工作者解決細(xì)胞最重要的問(wèn)題，如果您還是未找到問(wèn)題所在，歡迎您登錄鏡像綺點(diǎn)網(wǎng)站，關(guān)注鏡像綺點(diǎn)，我們期待著為您解答。

(上一篇)：人皮膚成纖維HSF細(xì)胞培養(yǎng)體系介紹
(下一篇)：什么是人皮膚成纖維HSF？