大鼠心肌細(xì)胞H9C2是原始克隆細(xì)胞系的亞克隆，由Kimes和Brandt組成，從胚胎bd1x大鼠心臟組織中獲得，表現(xiàn)出骨骼肌的許多特征。該細(xì)胞系中的成肌細(xì)胞可以融合形成多核肌管并對(duì)乙酰膽堿刺激作出反應(yīng)。如果培養(yǎng)基中的血清濃度下降到1%，融合就會(huì)迅速發(fā)生。

　　

　　大鼠心肌細(xì)胞H9C2處理：

　　

　　1、細(xì)胞復(fù)蘇：將裝有1ml細(xì)胞懸液的冷凍管于37℃水浴中搖勻解凍，加入4ml培養(yǎng)基混勻。1000轉(zhuǎn)離心4分鐘，棄上清，加入1-2ml培養(yǎng)基，吹勻。然后將所有細(xì)胞懸液加入培養(yǎng)瓶中培養(yǎng)過夜（或?qū)⒓?xì)胞懸液加入250px培養(yǎng)皿中，加入約8ml培養(yǎng)基培養(yǎng)過夜）。第二天，換液并檢查細(xì)胞密度。

　　

　　2、細(xì)胞傳代：如果細(xì)胞密度達(dá)到80%-90%，就可以進(jìn)行傳代培養(yǎng)。

　　

　　大鼠心肌細(xì)胞H9C2傳代方法：

　　

　　1、棄去培養(yǎng)上清，用不含鈣鎂離子的PBS洗滌細(xì)胞1-2次。

　　

　　2、在培養(yǎng)瓶中加入2ml消化液（0.25%trypsin-0.53mmedta），放入37℃培養(yǎng)箱消化1-2分鐘，然后在顯微鏡下觀察細(xì)胞消化情況。如果大部分細(xì)胞變圓脫落，迅速收回控制臺(tái)，輕敲培養(yǎng)瓶數(shù)次，加入少量培養(yǎng)基終止消化。

　　

　　3、按6-8ml/瓶加入培養(yǎng)基，輕輕打勻，吸出，1000rpm離心4分鐘，棄上清，加入1-2ml培養(yǎng)基吹勻。

　　

　　4、接受細(xì)胞后的一次傳代，建議將細(xì)胞懸液按1:2的比例分裝到裝有6ml培養(yǎng)基的新培養(yǎng)皿或瓶子中。建議冷凍1個(gè)備用，后續(xù)傳代根據(jù)實(shí)際情況按1:2至1:5的比例進(jìn)行。

　　

　　5、細(xì)胞冷凍保存：當(dāng)細(xì)胞生長(zhǎng)良好時(shí)，可以冷凍保存。